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發(fā)布時(shí)間:2023-02-11 19:05:57 作者:知網(wǎng)小編 來源:educationmanagementsystem.com
常用的蛋白質(zhì)分離鑒定的方法有哪些? 讓人們感興趣的目標(biāo)蛋白可以從不同來源的樣品獲得。 對(duì)于臨床診斷,蛋白質(zhì)可以從患者的細(xì)胞或組織得到,對(duì)于實(shí)驗(yàn)研究,可來自微生物或昆蟲、脊椎動(dòng)物及植物的細(xì)胞系。
不同種類的蛋白質(zhì)在分子大小方面有一定的差別,可用一些簡(jiǎn)便的方法,使蛋白質(zhì)混合物得到初步分離。 透析在純化中極為常用,可除去鹽類(脫鹽及置換緩沖液)、有機(jī)溶劑、低分子量的抑制劑等。 透析膜的截留分子量為5000左右,如分子量小于10000的酶液就有泄露的危險(xiǎn),在純化中極為常用,可除去鹽類、有機(jī)溶劑、低分子量的抑制劑等。
蛋白質(zhì)在用鹽析沉淀分離后,需要將蛋白質(zhì)中的鹽除去,常用的辦法是透析,即把蛋白質(zhì)溶液裝入秀析袋內(nèi)(常用的是玻璃紙),用緩沖液進(jìn)行透析,并不斷的更換緩沖液,因透析所需時(shí)間較長(zhǎng),所以最好在低溫中進(jìn)行。 此外也可用葡萄糖凝膠G-25或G-50過柱的辦法除鹽,所用的時(shí)間就比較短。
蛋白質(zhì)的制備一般分為以下四個(gè)階段:選擇材料和預(yù)處理,細(xì)胞的破碎及細(xì)胞器的分離,提取和純化,濃細(xì)、干燥和保存。 微生物、植物和動(dòng)物都可做為制備蛋白質(zhì)的原材料,所選用的材料主要依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩泶_定。