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發(fā)布時間:2022-03-31 15:19:42 作者:知網(wǎng)小編 來源:educationmanagementsystem.com
熒光定量PCR檢測技術(shù)誕生至今已10多年的時間,而其應(yīng)用一直都沒廣泛展開,究其原因,無外乎受制于相關(guān)儀器、 試劑 和技術(shù)的發(fā)展。 近期,尤其是08年以來,儀器和試劑是遍地開花,這也使科研人員均躍躍欲試,都想借此技術(shù)使自己的研究能突飛猛進,發(fā)展勢頭通過查找每年所發(fā)表的文章數(shù)可一目了然。
熒光定量PCR的應(yīng)用 分子生物學(xué)研究 1 核酸定量分析。 對傳染性疾病進行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型H1N1流感, 轉(zhuǎn)基因動植物基因拷貝數(shù)的檢測,RNAi 基因失活率的檢測等。 2 基因表達差異分析。
答: 每個基因序列長短不一,有的好幾kb,有的幾百bp,但是我們在設(shè)計引物的時候只需要要求產(chǎn)物長度80-300bp,太短或者太長都不適合做熒光定量PCR檢測。 產(chǎn)物片段太短,無法跟引物二聚體區(qū)分,引物二聚體的長度大概在30-40bp,小于80bp很難區(qū)分是引物二聚體還是產(chǎn)物。
Real-time-PCR和 qPCR (Quantitative Rea-ltime-PCR )是一碼事,都是實時定量PCR,指的是PCR過程中每個循環(huán)都有數(shù)據(jù)的實時記錄,因此可以對起始模板數(shù)量進行精確的分析。 雖然Real-time PCR(實時熒光定量PCR)和 Reverse transcription PCR(反轉(zhuǎn)錄PCR)看起來都可以縮寫為RT-PCR,但是,國際上的約定俗成的是: RT-PCR特指反轉(zhuǎn)錄PCR , 而Real-time PCR一般縮寫為 qPCR(quantitative real-time PCR)。