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發(fā)布時間:2023-09-13 14:35:52 作者:知網(wǎng)小編 來源:educationmanagementsystem.com
胰蛋白酶活性測定的方法與步驟. 在動物胰臟中,胰蛋白酶是以無活性的酶原狀態(tài)存在的。. 在生理條件下,胰蛋白酶原隨胰液分泌至十二指腸后,在小腸上腔有Ca2 的環(huán)境中,為腸 激酶 或胰蛋白酶所激活,其肽鏈N-端的賴氨酸與異亮氨酸之間的一個肽鍵被水解,失去一個酸性6肽,其 分子 構象發(fā)生一定的改變后轉變?yōu)榫哂写呋?蛋白質 水解活性的胰蛋白酶。. 胰蛋白酶原 分子 量約為24000,其等電點為pH8.9;胰蛋白酶的分子量約為23400,其等電點為pH10.8。. 胰蛋白酶在pH3.0時最穩(wěn)定,其濃溶液可貯存于冰箱 (0℃以下)數(shù)周而活性無顯著喪失。. pH<3時,胰蛋白酶易變性。. PH>5時,胰蛋白酶易自溶。.
以酪蛋白為底物,主要用于測定胰蛋白酶粗制品的活力。 胰蛋白酶催化水解底物酪蛋白生成不被三氯醋酸沉淀的 小分子 肽以及氨基酸。 在一定濃度范圍內,酶的水解濾液在波長275nm處光吸收的增值與胰蛋白酶的活力單位成正比。
經(jīng)溶 解后,以極少量活性胰蛋白酶激活,使其酶原轉變?yōu)橛谢钚?的胰蛋白酶(糜蛋白酶和彈性蛋白酶同時也被激活),被激 活的酶溶液再以鹽析分級的方法除去糜蛋白酶及彈性蛋白 酶等組分。 收集含胰蛋白酶的級分,并用結晶法進一步分離 純化。
胰蛋白酶原的分子量約為24000,其等電點約為pH8.9,胰蛋白酶的分子量與其酶原接近(23300),其等電點約為 10 pH10.8,最適pH7.6~8.0,在pH=3 時最穩(wěn)定,低于此pH 胰蛋白酶易變性,在pH>5 時易自溶。 Ca 2+離子對胰蛋白 酶有穩(wěn)定作用。